Sulforaphane çi ye?

Sulforaphane fytochemîk e, di materyalê isotîocyanate ya materyalên organosulfurê de, materyalek materyal e, li zeytên zêrîn ên zêrîn, wekî broccoli, kabbage, kulîlk û Brussels. Ew dikare di navenda bokê de, kale, kolek, pirtir û kincê jî tê dîtin. Lêkolînên lêkolînê nîşan dide ku sulforaphane dikare bi awayên cûrbecî yên kansera ji hêla pêşîlêgirtinê ve bikin çalakkirina Nrf2, an faktora nukleerî-têkildar erythroid 2-pêwendîdar, faktorek transkrîpsiyonê ku mekanîzmayên antioxidant ên parastina ku bersiva şaneyê ya li oksîdanan kontrol dikin, birêkûpêk dike. Armanca gotara jêrîn ew e ku fonksiyona sulforafanê vebêje.

Abstract

KEAP1-Nrf2-Pergala antioxidant li wateya sereke ye ku bi hucreyan re zextên zextên oksîdative û xenobiot re bersiv bikin. Sulforaphane (SFN), anotrokola elektroilîk-ê ji ji aliyên zêrîn ve derxistiye, KEAP1-Nrf2-rê de tête çalak kirin û di nav tedawiyên nexweşiyên ekolojî de roleke etîkolojîk girîng dike. Em li vir nîşan didin ku mîtochondrayê yên çandî, însanîteya rîtalê ya înfîtalial (RPE-1) bi SFN re tête kirin ku hîperfusion tête ku ji serbixwe ji hem Nrf2 û cytoplasmic ê KEAP1 ve ye. Fusion mîtochondrial hat ragihandin ku ji hêla apoptosyonê de di mitochondria de pirooprotîkî ve veguherîne, û bi vê yekê re, em nîşan bide Nrf2-serbixwe, kytoprotkirinê ya hucreyên SFN-ê bi apoptos-inducer, storporosine. Masonî, SFN ji bo faktoriya fissionkirinê ya Drp1 bi mitochondria û peroxoksiyonên veguhestina / / an jî veguhestina kêmkirina lêgerîn lê belê tevahî pirrjimara Drp1 bandor nake. Ev daneyên nîşanî nîşan dide ku taybetmendiyên sosyal yên SFN ji ber çalakiya KEAP1-Nrf2-ê pergala wê de bêtir dirêj kirin û lêpirsînek bêtir lêpirsînerê vê karûbarê darizandinên tedawî yên piraniya klînîk.

Keywords: Sulforaphane, Nrf2, Drp1, Mitochondria, Fission, Fusion, Apoptosis

Pêşkêş

Sulforaphane Nrf2-Bendava Serbixwe ya Fikra Mitotondrial

Sulforaphane (SFN) komek isothiocyanate ye ku di xwarinê de pir bi gelemperî sebên zêrîn ên xemgîn e [56]. Ew di nifşan de wekî bersivê xenobiotic bersiva pêşveçûnê ji rêya serbestberdana vesîkular ên enzyme-hîdrojen-ê ku ji hucreyên zirarê çêkir; ev enzyme glucosinolates bi toothiocyantes veguherîne [42]. Di du deh salên dawî de, SFN ji bo agahdariya anticancer, antioxidant û antîmicrobialîteya xwe ya mezin [57] hate kêşandin. Gelek ji vê bandoriya vê bandoriyê ji bo kapasîteya SFN tête kirin ku ji hêla bersivê KEAP1-Nrf2-antioxidant-ê (ARE) veguherîna rêwîtiyê ve dike, tevî çalakiyên din ên ku dihêle naskirin, tevlîhevkirina çalakiya hestone deacetylase û pêşveçûna hucreyê [ 29]. Nrf2 faktora veguherandina antioxidant e û di bin mercên malostasiyê de, wê ewlehiya bi çalakiya cytoplasmic Cullin3KEAP1 ubiquitin veguhestina ziracê [20] bi zordestî ye. Bi taybetî,, Nrf2 ji alîyê KEAP3-ê adapterê dimirek dîmerîka Cullin1KEAP1 ve tê veguhestin û bi zincîla polyUb ve ye ku ji hêla faktoriya veguherînê ve ji hêla hilweşandina proteasome-mediated. Guhertina vê constitutive nîv-jiyanê ya Nrf2 di hucreyên bêhûrkirî de ~ 15 min [30], [33], [46], [55]. Di bersivê de gelek tecrûbeyên tundûtûjiyê, piranîya stratejiya oksîdative, KEAP1, proteînek dewlemend a cysteine-dewlemendê, wekî guhertineke olî ya oxirative, û guhartina oksîdative cysteinesên taybetî yên taybetî, C151, ya KEAP1 ji NULFNUMX-KEAP2 ji CUL1 ve ji ber vê yekê ji ber astengkirina Nrf3 de [ 2], [8], [20]. Bi taybetî, SFN, û dibe ku çalakvanên din ên Nrf55, ji hêla C2 ya KEAP151 veguherîne, wekî mînak [1] veguherîna oksîdative stress. Stabilization of Nrf21 ji bo nucleus ve tê wergerandin ku ew eşkere dike ku şerta bileziya antioxidant û jenoxoxa Phase II. Nrf2 bi bersiva antioxîdantên prototer (BERS) ji hêla gravên armancên veguhastina bi proteînên mafên Mafê biçûk [2] ve girêdayî dikin. Ev pergalê bersivên dînamîk û nermalîfên nerastî yên antîxîdîdan wek SFN, radîkayên azad ên ji aliyê mitochondria ve [znumx], an çavkaniyên fizîkî yên fizîkî yên oksîterê yên [19] têne çêkirin.

Mîtochondria organîzasyonên dînamîk, dîskulîk ên ku ji bo fonksiyonên hucreyî ve têne kontrolkirin, ji hilberandina ATP û kataliya intracellular re ji bo rêbazê redox û apoptos [13], [49]. Mitochondria jî çavkaniya sereke ya nifşên oxygenên reaksiyon (ROS) di nav hucreyê de nimûne. Ji bo rêbazeke rêjeya fonksiyonên mitochondrial divê ji bo pêşxistina çêkirina ATP-ê hewceyên hucreyî yên mûzîkal û bi bandorên kêmtirîn bandorên zehf ên ku hilberîna radîkal ên bêhtir belaş ên bêkêmasî yên bêkêmasî pêwîst e. Pêdivî ye ku ji bo modulasyona baş ya fonksiyonê ya mîkochondrial, hema kapîtalîstan ji bo mitokondraya herdu serbixwe wekî makîneyên biochemîk û wekî beşek ji torê reklamatîf.

Morfolojiya mozochondrial û fonksiyonê ji hêla balyozê rêbazê ve di navbera fission û fusion de têne diyarkirin. Ji bo qirêjiya mitochondrial ji bo mîrata mîkochondria di çarçoveya hucreyê de [28] û herweha ji bo hilbijartina xweseriya autofagîk ya mitochondrayê, xweya mitophagyayê [1] tête kirin. Bi awayekî berbiçav, fusion divê ji bo jînokomên mitochondrial û parvekirina beşên zexmî yên navbera mitochondria cîran [54] hewce ye. Di asta molecular de, fission mitochondrial û fusion ji hêla mezin, dynamin-like GTPases ve têne rêve kirin. Her sê enzîmên sereke bi destûra rêveberiyê: Mîtofusins ​​1 û 2 (protein) ku du bi rêberên membranên derveyî yên membrane ve tê navnîşî bi rêya têkiliyên heterotypîk di navbera mîkochondria (1), [2], [15] de, lê dema OPA25 hundir e Pro protein ku bi heman demê re têkiliyek matrixê dike ku ji hêla meldingê hundurên membranan ve tê kontrol dike. [37]. Çalakiya GTPase ji bo her sê proteînan hewce ye ku ji berhevkirina hêzê [1], [5], û OPA5 bi hêla prototîsiyonê tevlihev ve di nav membrokê mitokonduralî de ji hêla OMA18 [1], PARL [1], û YME14L ve tê birêve kirin. [6 ]. Girêde girîng, membranek mîkochondrial zehmet e ku ji bo mûzochondrayê zehf û tendurustî xurt bike [1].

Daxistina mitochondrial ji hêla protein a cytosolic ve tê gotin ku navê Dynamin-girêdayî protein 1 (Drp1 / DNM1L). Drp1 ji cytosol ve tête navnîşên derveyî malperên ku ji ber xemgîniya li membrokujiya derveyî mitochondrial [43] ve tê avakirin. Receptorên sereke yên ji bo dagirkeriya derveyî Drp1 li ser faktorê fission-mit (Mff) [32] û ji hêla kêmtir, Fission 1 (Fis1) [51] ne. Di heman demê de, reaksiyonek biryarek, MIEF1 / MiD51, hate dîtin ku çalakiyên din jî çalakiya Drp1-ê li ser destûra fissionên potansiyonê sînor bikin. [58]. Dema ku li membranek derveyî mitochondrial, dpxNUMX oligomerizes di çarçoveya mîzochondrionê de û hingê dravên ji GTP hîdîlysîs bikar tînin ku ji bo dahatina fîzîkî ya mîkroondî ya hundur û hundurên hundir [1] bikar bîne. Tubulesên derûnî yên retopulum-reticulum-ê wekî pêşî yê mitochondria-yê ku ji DP17 oligomerîzasyona doktorî ya xpxNUMX-ê veguhestin, nehêlin ku ne-constricted mitochondria ji hêla dermanê dermanê ya Drp1-1] tewre ne. Dynamîsên Actin jî ji bo pêşveçûnên ER-mitochondria girîng ên ku ji ber desthilatdariya mitokondrial [12] girîng e. Ji bilî rola xwe ya lihevhatina mitokonduryê, Drp24 kelepkirina peroxyozên [1] catalyaz dike.

Drp1 bi proteînek baş-taybetmendiya dynamîn e ku di protein de hem jî di navenda GTPase de, navînek Navîn e ku ji bo xwe-oligomerîzasyonê rexne ye, û navnîşa GTPase-yê Dîmenderê GTPase-yê [31] pir e. Drp1 bi rêya hevpeymaniya danûstandinên bi reklamên xwe yên Mff û Fis1 û herweha ji hêla wê re di navnîşa mitfondria-xweya phospholipid-cardiolipin-yê devera B-insert-yê Drp1 [2]. Drp1 bi gelemperî wekî homotetramer di cytoplasmê de, û civîna bilindtirîn de li ser malperên fikrkirinê yên mitochondrial tête navnîşa navîn ya Navneteweyî ya Drp1 [3].

Gava girêdana implicit di navbera çalakiya mitochondrial û KEAP1-Nrf2-rê de, me çalakiyên Nrf2 li ser bingeha avahiyê û fonksiyonê mitochondrial lêkolîn kirin. Em li vir nîşan didin ku SFN ji hêla mîkochondrial mitokondrial veguhastin ku, nerengî, hem ji Nrf2 û KEAP1 serbixwe ye. Ev bandora SFN bi veguherîna Doktoriya Drp1 e. Em bêtir nîşan didin ku SFN berxwedana apoptosîsyonê dike ku Nrf2-serbixwe û mimics ku di hucreyan de ji Drp1 ve hatî dîtin. Ev daneyên kolektîf bi awayekî nîşanî nîşan dide ku di bila nûkirina NBF2 de, SFN dynamics modulates modulates û fîzîkî û berxwedana hucreyê parastin.

results

Sulforaphane Têkilî Nrf2 / KEAP1-Hyperfusion serbixwe Mîtochondria

Di dema lêkolîna bandorên çalakkirina Nrf2 de li ser dînamîkên torgiloka mitokondriyal, me dît ku dermankirina şaneyên epîteliyal ên pîgmenta retînala mirovî (RPE-1) bi sulforaphane (SFN), çalakvanek potansiyel a îşaretkirina Nrf2, nemir, şanek bihêz a tora mitokondriyal dema ku bi şaneyên kontrolê yên bi wesayît-dermankirî re were qiyas kirin (Hêjîrê 1A û B). Morfolojiya mitokondriyê di van şaneyan de pir dişibihe mitochondria-ya di şaneyên ku ji hêla siRNA-ya endogenous Drp1, faktora dabeşîna mitokondriyal a sereke ve hatîne xilas kirin (Hêjîrê 1A). Vê encamê ramanek balkêş derxist ku têkela mitokondrîal û rewşa fusionê rasterast bersivê dide astên Nrf2 ên di şaneyê de. Lêbelê, teşwîqkirina şaneyên bi stabîlîzator û aktîvatorên din ên Nrf2 ên mîna pêşgir a proteasome MG132, tBHQ ya pro-oksîdant, an jî hilweşandina pêşgir a Nrf2 KEAP1 fusiona mitokondriyal çênekir (Hêjîrê 1A û B). Stabilîzasyona Nrf2 bi van manîpulasyonan ji hêla rojavaya rojavayî ve ji bo Nrf2-a endogjen (Hêjîrê 1C) hate pejirandin. Wekî din, derbirîna Nrf2 ji bo fusion mitochondrial-a-SFN-ê veberhênêr bû, ji ber ku xistina Nrf2-a endogenous bi siRNA nikaribû li hember vê fenotype bisekine (Hêjîrê 1D F). Ji ber ku SFN bi guhertina bermahiyên cysteine ​​a KEAP1 [2] riya KEAP1-Nrf21-ARE teşwîq dike, me KEAP1 xist xwarê da ku navnîş bike ka gelo hîperafuzyona mitokondrî ya SFN-pêgir bi rêya KEAP1-ê ve girêdayî ye, lê Nrf2 serbixwe ye. Lêbelê, tunebûna KEAP1 jî têkbirina têkeliya mitokondrî ya SFN-hilweşandî (Hêjîrê 1G I) têk çû. Bi rastî, SFN morfolojiya pro-fîsisyonê ya ku ji hêla kêmkirina KEAP1 ve hatî vegerandin berevajî kir (Hêjîrê 1G, panel b li hember panel d). Van encaman diyar dikin ku dermankirina SFN dibe sedema fuzyona mitokondrîal a serbixwe ya rêbaza KEAP1-Nrf2-ARE ya kanonîk û rê da me ku em lêpirsîn ka SFN rasterast bandorê li pêkhateyên dabeşbûna mitokondrîal an makîneyên fusion dike.

Sulforaphane Komeleya Mitochondrial ya Drp1

Li gorî dîtina ku SFN-tedbîra hîpa mîkroondrial mitokondrial dihêle, me fikirîn ku ev phenotype jî encam an çalakiya fizîkî an jî pêşangeha fissionkirinê bû. Ji ber ku du van derfetên van van du derfetan de, em morfolojiya peroxisomên di dereng û nebûna SFN de bi hev re didin. Peroxisomes wekhev mitochondria e ku di organizyonên dînamîk de dimînin û dirêjahiya ku bi berdewam di flux [44] de ye. Peroxisomes di nav membrana xwe de Fis1 û MFF jî hene, û encama vê yekê, armancên ji bo dermankirinê ya Drp1-22] [23] hene. Lêbelê, peroxisomes nexşeya mîkrofona torê ya mitochondrial nayê bikaranîn û bi encama vê yekê, nehêle nehêle [39]. Belê, fission peroxisomal ji hêla dirêjkirina peroxisomes ve tê de ji hêla nevoşên membran û protein [44] dijberî dijberî ye. Ji ber ku peroxoxomên MFn1 / 2 û OPA1 ne, me fikirîn ku eger SFN makîneya mîkrofê dike ku bêtir ji pîşesaziya fîsansê ve dike, peroxisome-ê bandor neyê. Di hucreyên tedawî de, peroxisomes bi rêkûpêk, kurt, rêgezên punctiformî têne parastin (Fig. 2, panels b û d). Lêbelê, SFN tedbîra dirêjkirina peroxisome ji hêla ~ 2-fold bi zêdebûna hucreyên kontrola (2, panelên f û h) pêk tê. Wekî din, pir ji peroxisomên nêzîkî navendê dakêşin, nîşan dide ku dîskek potansiyonê potansiyonê (nîşan bide 2, hanê, panela panor, armanc). Bi vî awayî, peroxisomên di hucreyên vekirî de bi Drp1 siRNA pir dirêj bûn. (Fig. 2, panels j û l), piştrast dikin ku ji bo Drp1 ji bo faksiyonê peroxisomal hewce ye û hewce dike ku SFN-tedawî dibe ku pêdivî ye ku SFN-tedawiya fenotondrial û peroxisomal fenotypes bi rêbaziya fissionê veguherîne.

Dûv re me diyar kir ku SFN çawa fonksiyona Drp1 sînor dike. Di nav îmkanan de kêmkirina astên derbirînê, peydakirin / ragirtin li mitochondria, oligomerîzasyon, an çalakiya enzîmatîk a GTPase. Kêmasiyek di yek ji van de dê bibe sedema kêmbûna şikestina mitochondrial û hîperfusionê. Me piştî dermankirina SFN-ê di astên proteîna Drp1 de guherînên ji nû ve hilberandin tesbît nekir (Wêne. 1C û 3A), û ji ber vê yekê encam da ku SFN îstîqrara Drp1 an derbirînê naguhezîne, digel ku Drp1 ku nîv-jiyana wî ya >10 h heye [50] û tedawiyên me yên SFN-ê demek kurttir in. Dûv re, me lêkolîn kir ka SFN bandor li ser jimartin an girtina Drp1 li mitochondria kir. Lêkolînên fraksîyonê destnîşan kirin ku SFN windakirina Drp1 ji beşa mîtokondrîal derxistiye (Hêjî. 3A, rêçikên 7-8 û Fig. 3B). Wekî ku berê hate ragihandin [43], tenê beşek piçûk a Drp1 (~ 3%) di her demek diyarkirî de di nav şert û mercên rewşa domdar de bi tora mîtokondrîal re têkildar e ku piraniya enzîmê di sîtoplazmayê de dimîne (Wêne. 3A, rêçikên 5-8 ). Van daneyên perçebûnê bi karanîna analîzên hev-herêmî ve hatin pejirandin ku piştî dermankirina SFN-ê kêmbûnek ~40% di nav mitochondria-lokalîzekirî, xalîçeyên Drp1-ê de nîşan da (Wêne. 3C û D). Bi hev re, van daneyan destnîşan dikin ku tevhevbûna mîtokondrî ya ku ji hêla SFN ve hatî çêkirin, bi kêmî ve hinekî jî, ji ber girêdana qelskirî ya Drp1 bi mîtokondriyayê re ye. Daneyên me cihêtiyê naxin navbera gelo SFN di berhevkirina mîtokondrî de li hember ragirtina mîtokondrî ya Drp1, an hem jî, ji ber ku vekolîna Drp1-ya endojen ne ji hêla mîkroskopiya hucreya zindî ve xuyangkirina GTPase-ê re têkildar bû.

Parastina Parastina Sulforaphane Storgosportine-Appltosis Înternetê ya Nrf2

Xebatên berê destnîşan kirin ku veqetîna mîtokondrî di avakirina porên di membrana mîtokondrî ya derve de ku ji hêla Bax/Bak ve di dema apoptozê de hatî çêkirin de destûrdar e [11]. Drp1 hate destnîşan kirin ku di dema apoptosisê de [11] bi bijartî ji mitochondria re tê jimartin û, li gorî vê yekê, mîtokondrîyên perçebûyî di destpêka pêvajoyê de hatine dîtin [27]. Berevajî vê, tê fikirîn ku astengkirina veqetandina mîtokondrîal bi astengkirina avakirina porên membrana derveyî ku destûrê dide berdana cytochrome c, apoptosis asteng dike [53]. Li gorî vê yekê, teşwîqkirina hevgirtina mitokondrîal pêşkeftina apoptoza ku ji hêla pêkhateyên di nav de staurosporine (STS) ve hatî çêkirin dereng dixe [14]. Ji bo ku diyar bikin ka SFN hucreyên RPE-1 ji apoptoza bi navbeynkariya STS diparêze û heke wusa be, gelo ev hewceyê Nrf2 hewce dike, me ceribandinek damezrand da ku bi hêsanî perçebûna polî ADP ribose polymerase (PARP), substratek kaspase-3-ya aktîfkirî û nîşankerek diyarker ava bike. apoptosis. Dermankirina şaneyên RPE-1 bi 1 �M STS ji bo 6 saetan tenê bû sedema perçebûnek pir nerm a PARP-ê, lê dîsa jî ev yek ji hêla hev-dermankirina SFN ve hate asteng kirin (mînak, Fig. 4A, rê 3 ber 4). Ji bo ku zexmbûna vê ceribandinê zêde bikin, me hucreyên bi apoptoza STS-ê vekêşandî hesas kirin bi pêşîgirtina wan bi siRNA ku faktora dij-apoptotîk, Bcl-XL hedef digire. Vê pêş-dermankirinê îfadeya Bcl-XL kêm kir û bi rengekî berbiçav veqetîna PARP wekî fonksiyonek dema ku ji STS re tê xuyang kirin pêşve xist (Wêne. 4B, rêça 2-ê bi rêzikên 4-10 re bide berhev). Ya girîng, 2 demjimêrên pêş-dermankirina bi SFN veqetandina PARP-ê di hucreyên ku ji STS-ê re rû bi rû ne (Wêne. 4C, rêça 3 beramberî 4 û rêça 5 beramberî 6) kêm kir. Di heman demê de, şaneyên ku ji hêla CRISPR/Cas2 ve ji Nrf9 bi îstîqrar hatine kêm kirin bi pêş-tedawiya SFN-ê ve ji jehrîbûna STS-ê bi berawirdî hatine parastin (Hêjî. 4C, rê 11 ber 12 û rê 13 ber 14 û Fig. 4D). Ev parastin bi karanîna hem perçebûna PARP (Hêjî. 4C û D) û hem jî morfolojiya hucreyî (Hêjî. 4E) wekî xwendinê hate dîtin. Bandoriya kêmkirina Nrf2 ji hêla CRISPR/Cas9 ve ji hêla western blotting ve hate pejirandin (Wêne. 4C, blot Nrf2). Wekî ku tê pêşbînîkirin, kêmbûna şaneyên Drp1, ku di heman demê de fenotîpek hîperfusionê (Hêl. 1A) jî derdixe holê, di heman demê de li gorî şaneyên kontrolê yên ku bi SFN (Hêjî. 4F û G) hatine înkubakirin, perçebûna PARP-ê jî di bersiva STS de asteng kir. Bi hev re, van vedîtinan bi SFN-ê re hevaheng in ku parastina li dijî apoptozê bi kapasîteya wê ya sînorkirina fonksiyona Drp1, serbixwe ji aramkirin û aktîvkirina Nrf2 re peyda dike.

Nîqaş

Me dît ku SFN di bandorên KEAP1-Nrf2-rêwîtiyê de li ser bandorekên serbixwe yên dînoksiyonên mitochondrial / fusion-modulasyonên modulasyon re modulates. Ew ji ber ku girêdayî navbera girêdana mîkochondrial û hilberandina ROS û hewceyê ji hêla çalakiya Nrf2-ê radikên azad ên mitokondria-derengkirî yên mîkochondria-derkêşkirî ye. Ev bandorek bandorên SFN yên girîng ên girîng ên girîng e ku ji hêla TERKALÎKÊN 30 ve niha tedawîkirina SFN ji bo tedawiya cûreyên cûrbekirî, kansera prostatek, astengkirina pepperwerî, û nexweşiya nexweşê nexweşê [7], [10], [ 47].

Ji ber ku SFN anotomocyanate ye [56] û wê Nraf2 nîşan dide ku bi rasterast KEAP1 cysteines kêşeyên Nrf2 hilweşînin [21], bi vî awayî, ku SFN bi bandorên fenîşandanê an fîzîkî an fîzîkî veguhertina fîzîkî bi rêya guherandina cysteine ​​veguherîne dike. . Daneyên me bi hêza doktorê Drp1 piştgirî dike ku bi SFN ve têne birêve kirin, her çiqas GTPase yekser hedefa acîlasyonê ye ku ew nayê zanîn. Tevî vê zanînê dakêşin, fonksiyonê ya Drp1 bi SFN ve tête peyda kirin ku wekî mitokondria û peroxisomes hem bersîva şopandina SFN û van rêxistinan ji bo bûyerên danûstandinên xwe yên Drp1 ve girêdayî ye. [38]. Herweha, SFN ji hejmara Drp1 kêm dike ku li herêmên mitokondria herêmî dike û hilberîne (Fig. 3). Ji ber ku ezmûnên me bi protein-hemî protein-ê de, ku teslîmên me yên Drp1-ê li ser malperên derxistina mitochondrial di bin mercên dewlemend-dewlet de ne, di encam de, û encama vê yekê, em nikarin di navbera navendkirina avêtina kêşeya enzyme de ji aliyê SFN ve veguherîne. Dîsa jî, em nikarin derfetek ku SFN re receptor li mitochondria (Fis1 an jî Mff) digire da ku barkirina Drp1 asteng bikin, em guman dikin ku Drp1 bi rasterast guherîn. Drp1 ne nine cysteines hene, heşt ji wan di nav Domain-Navîn de ye ku ji bo oligomerîzasyonê ye. [3], û yek ji kîjan di navenda GTPase Effector Domain (GED) de li C-terminus a Drp1 heye. Derhêneriya yekser ya yek ji cysteines dikare bibe sedema çalakiya Drp1 di bin û ji ber bandorên SFN li dînamîksiyonên mitochondrial binivîse. Bi taybetî, karên berê pêşniyar dike ku xeraban di oligomerîzasyon û çalakiya katalîtîk dikare dikare dorpêçkirina Drp1 li mitochondria [52]. Cys644 di nav GED deverek bi taybetî bi balkêş e ku armancên berê yên ku mutasyonên fenocopî yên pîşesyonê yên ku dihêle Drp1 çalakiya GTPase de çalak dibe [4] û ku ev cysteine ​​bi rêya elektrofîlên xweser-reaktîf [9] hate guherandin. Pirsgirêka vê pirsê ya berbiçav be, dê hewceyê pişka spromotrometric gerek pêwîste. Vebijêrk, em felsefê cytoprotîk, ji bo SFNê klînîkî-peywendîdar-ê naskir. Herweha ku çalakiya faktoriya ant-oxîdantê Nrf2 ve çalak bike, SFN jihevkirina mitokondrial û peroxisomal pêşve dike, û ev bandor ji Nrf2 serbixwe ye. Mîkrofîzma bingehîn vê fenomenê de di karûbarên GTPase Drp1 de, di navendê sereke ya sereke ya mitochondrial û peroxisomal kêm dibe. Bê encama sereke ya SFN-medyaya mîkochondrial-mediated de ev e ku ew hucreyên bandorên zextê yên yên apoptosis-inducer-storosporine bisekinin. Ev çalakiya cytoprotîkî ya SFN dikare di nav gelek nexweşiyên neurodegenerative de gelek taybetmendiya klînîkî ya ji bo ku fêmbûna fiktoriya rîska sereke ye (mînak, Nexweşiya Parkinson, Nexweşiya Alzheimer, Dîkrojmarê Macîk-related-ê-ê-related-related-age-related), wekî van maladiyan bi apoptosî û kêmtir bûne ast û / an dysregulation ya Nrf2 [35], [36], [48].

Alav û Rêbaz

Assoptosis Assays

Wekî ku li jêr tê xuyandin şaneyên bi siRNA hatin tov kirin û veguheztin. Hucre bi 50? M sulforafanê ji bo 2 h pêş-dermankirin da ku fusionek mitokondriyal derxîne û paşê bi 1? M staurosporine re derman kirin da ku apoptozê derxîne. Di dema dirûnê de, medya di nav lûleyên takekesî de hate berhev kirin û ji bo hucreyên apoptotîk ên pellet bi siftkirina zêde leza hate sandin. Ev pelleta şaneyê bi şaneyên pêgirtî re hate hevgirtin û di tampona Laemmli ya 2 carî-komkirî de hate solubilîzekirin. Nimûne li dijî şilkirina rojava ya dijî-PARP hatin kirin.

CRISPR / Cas9 Hilberîna Avakirin

Ji bo afirandina LentiCRISPR / eCas9 1.1, LentiCRISPR v2 (first addictê #52961) bi Age1 û BamH1 ve hate avêtin. Piştre, SpCas9 ji eSpCas9 1.1 (addgene #71814) bû ku PCX amplified bi Age1 û BamH1 bi karûbarên jêrîn bi kar tîne (Pêşniyara AGCGCACCGGTTCTAGAGCGCTACCCCATGGACTACTAGGACCACGAC, RED AAGCGCGGATCCTTTTTTCTTTTTTGCCTGGCCGG) û di binê vekêşê vekirî de jor kirin. rêzên sgRNA yên bi Benchling.com têne bikaranîn. Parameters ji bo kampanyaya kodê hedef kirin ku bi bilindtirîn-hedef û herî kêm-hejmarên herî kêmîn. Rêzkirinên li jêr (hedef cihekê wiha, HS sgNFE2L2 # 1 wateya CACCGCGACGGAAAGAGTATGAGC, antisense AAACGCTCATACTCTTTCCGTCGC; hs sgNFE2L2 # 2 CACCGGTTTCTGACTGGATGTGCT wateya, AAACAGCACATCCAGTCAGAAACC antisense; hs sgNFE2L2 # 3 wateya CACCGGAGTAGTTGGCAGATCCAC, antisense AAACGTGGATCTGCCAACTACTCC) Galvanized û ligated nav BsmB1 birrîn LentiCRISPR / eCas9 1.1 bûn. Lênêrîna lênêrîna rentî yên RPE-1 bi puromycin ve hatin hilbijartin û wek nifûsa pisîk têne hilbijartin. Pevçûn ji hêla emunofluorescence û pişka rojavayî ve hat pejirandin.

Çandî û Transfîzyonên Çandî

Hucreyên epîtelî yên pigmental ên retînalê yên ku bi telomeraz (RPE-1) (ATCC) hatine veguheztin li Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) 1 g / L glukozê ku bi penîsîlîn, streptomycin, 1X kokteylê amîno asîd nezêdekirî (Teknolojiyên Jiyan), û 10% Serum Bewine Fetal (Teknolojiyên Jiyanê). Ji bo siRNA-veguheztinan, 30,000 35,000 şaneyên / ml bi şev şûştin. Hucreyan 10 nM siRNA ya ku di DMEM-a bê serûm de hatî hûr kirin û bi 0.3% reagensê veguheztina Interferîn (PolyPlus) re hevgirtî stendin. Ji bo hestiyariya apoptozê, şaneyan 1 nM Bcl-XL siRNA stendin. Hucreyên piştî veguhastinê 2 3 roj hatin berhev kirin.

Kîmyewî, Antibodies, û siRNA Oligos

Antîbodiyên li dijî? -Tubulin (alingşaretkirina Hucreyê),? -Tubulin (Sigma), Drp1 (BD Biyolojî), KEAP1 (Proteintech), Lamin B1 (Abcam), PARP (Cşaretkirina Hucreyê), PMP70 (Abcam), û Tom20 (BD Biyanîstan) ) ji bo pehnkirina rojava û ji bo immunofluorescence di 1: 1000 hûrgulî de hatin bikar anîn. Di nav malê de, antîboa rabbitê ya dijî-Nrf2 li 1: 2000 ji bo şilkirina rojavayî hate bikar anîn [34], [59]. Sulforaphane (Sigma) û staurosporine (Tocris) bi rêzdarî li 50? M û 1? M hatin bikar anîn. siRNA li dijî Drp1 (Dharmacon), Nrf2 (Dharmacon), KEAP1 (alingşaretkirina Hucreyê), û Bcl-XL (alingşaretkirina Hucreyê) di 10 nM de hate bikar anîn heya ku tiştikî din neyê diyar kirin.

Immunofluorescence û li Label Vivo

Hucreyên ku li ser pêçikên cama 18 mm hatine nijandin bi wesayît an derman têne derman kirin, di 3.7%% formaldehyde de hatine bicîh kirin û piştre di 0.2% Triton X-100 / PBS de 10 hûrdeman li ser cemedê permeîlîze dibin. Antîbodîdên seretayî di PBS-ê de şevê de di 3 C de di 4% albumina serum ajal (BSA) de asê bûn. Li dû şûştinên PBS, şaneyên ji bo 1 h di nav celeb-guncan, Alexa488- an Alexa546-, antîbodiyên duyemîn ên girêkbûyî de (1: 1000 xavkirî) û 0.1? G / mL DAPI (Sigma) di 3% BSA / PBS de hatin şandin. Mitochondria an ji hêla immunofluorescence dijî-Tom20 ve an ji hêla şaneyên înkubatasyonê ve di 200 nM MitoTracker Red CMXRos (Lêkolînên Molekular, Inc.) di DMEM-a bê serûm de ji bo 30 hûrdem di 37 C de berî xilaskirinê xuyang kirin.

Microscopy and Image Analysis

Nimûneyên immunofluorescence li ser mîkroskopek LSM710 Confocal (Carl Zeiss) hatin dîtin. Mîkrografî bi karanîna armancên binavkirina rûnê 63X an 100X û wêneyên ku bi karanîna Adobe Photoshop CS6 ve hatine verastkirin û zêdekirin hatin girtin. Analîza hev-lokalîzasyonê bi karanîna Carl Zeiss LSM710 taybetmendiya hev-lokalîzasyonê ya bi sînor bi destan ve hatî danîn dema ku ji nasnameya nimûneyan re kor bû hate çêkirin. Barkên pîvanê li seranserê, heke tiştikî din neyê diyar kirin, 10 m in. Morfolojiya mîtokondriyê ji hêla pûankirina blind ve hate nirxandin. Ger mitokondriya şaneyekê wekî pûnga pir, dor, cûdakar were domandin, hucre wekî fîsîsyonê hate hesibandin. Ger mitokondriyên takekesî nediyar bin û tevna tevna mitokondriyê berdewam bidîta, hucre wekî fuzyon scored hate nîşankirin. Hemî şaneyên din, tevî yên ku bi mitokondriya kombûnê ne, wekî "navîn" hatin hesibandin.

Nerazîbûnên Subcellular

Hucreyên RPE-1 li hevûdu hatin mezin kirin. Li dû şûştina PBS, şaneyên di 600gg de ji bo 10 hûrdeman hatin siftkirin û di 600? L tampona îzolasyonê de (210 mM Mannitol, 70 mM Sucrose, 5 mM MOPS, 1 mM EDTA pH 7.4 + 1 mM PMSF) ji nû ve hatin şandin. Suspansyon 30 carî di homojenîzekerê Dounce de hate lîz kirin. Parçeyek ji homojenate wekî lîzata şaneyê ya tevahî hate parastin. Ya mayî li 800 g ji bo 10 hûrdem heya navikên pellet hate siftkirin. Supernatants ji bo paqijkirina nokleyên mayî û şaneyên bêserûber di 1500 hûrdeman de di 10 g de ji hêla siftê ve hatin derbas kirin. Ev supernatant di 15,000gg de ji bo 15 hûrdem bi mitokondriya pellet hate sift kirin. Supernatant wekî sîstozolik fraksiyon hate parastin. Pellet bi PBS bi nermî hate şûştin û di tampona tecrîdê de ji nû ve hate rave kirin. Piraniya proteîna her perçeyek ji hêla tehlûkeya bicinchoninic acid (BCA) ve hate pîvandin û mîqdarên hevkêşeyê yên proteîn ji hêla SDS-PAGE ve hatin çareser kirin.

Blotting Western

Hucre di PBS de hatin şûştin û di tampon 2-carî konsantrekirî ya Laemmli de (100 mM Tris [pH 6.8], 2% SDS, 0.008% bromfenol şîn, 2% 2-merkaptoetanol, 26.3% glycerol, û 0.001% Pyrinin Y5) hatin çareser kirin. Lîzat 1 hûrdeman hatin kelandin berî ku li ser gêlên polyacrylamide sodyum dodecyl sulfate (SDS) werin barkirin. Proteîn veguheztin parzûnên nîtroselulozê û parzûn di %5 Milk/TBST de 5 saetan hatin asteng kirin. Antîbodên seretayî di %4 Şîr/TBST de hatin rijandin û bi blotê di şevekê de di 5 °C de hatin înkubakirin. Di XNUMX% Milk/TBST de antîbodên duyemîn ên hevgirtî yên Horseradish peroxidase (HRP) hatin rijandin. Blot bi kîmyoluminescence ya pêşkeftî ve hatin hilberandin û hejmarên densîtometrîk bi karanîna nermalava ImageJ ve hatin kirin.

Sulforaphane kîmyewî ji komkirina estotiocyanate veguhastina materosulfurên ku ji zincîranên zêrîn ên zindî hatine girtin, bi brokoli, cabbage, kulîllo, kale û kolek, di nav kesên din de. Sulforaphane tê hilberandin dema ku enzyme myrosinase veguherîna glucoraphanîn, glucosinolate, sulforaphane, wekî sulforaphane-glucosinolate jî tê naskirin. Broccoli sprouts and cauliflower is the concentration of glucoraphanin or precursor to sulforaphane. Lêkolînên Lêkolînê lêkolîn kir ku sulforaphane kapasîteyên antîxîdant ên ku ji bo pirsgirêkên tendurustiyê yên pêşveçûnê zêde dike. Dr. Alex Jimenez DC, CCST Insight

Sulforaphane û Bandorên Wê Li Ser Penceşêr, Mirin, Pîrbûn, Mêjî û Reftarî, Nexweşiya Dil & Zêde

Isothiocyanates hin hinek komên plankirî yên ku hûn di xwarinê de ne. Di vê vîdyoyê de ji bo wan ku ew her dem hatiye çêkirin pir girîng e. Hûrgelan kêmtir? Ji mijara yek ji xalên jêrîn bitikîne bi mijara xwe ya bijartinê vekin. Tiştek temamî bin.

Sernavên sereke

• 00: 01: 14 - Cancer û mirinê
• 00: 19: 04 - Aging
• 00: 26: 30 - Brain and behavior
• 00: 38: 06 - Reqameya dawî
• 00: 40: 27 - Dose

Full timeline:

• 00: 00: 34 - Destpêkkirina sulforaphane, fikirîn sereke ya vîdyoyê.
• 00: 01: 14 - Gelek mirin û kêmkirina xwarinê hemî mirinê.
• 00: 02: 12 - rîska kanserê Prostate.
• 00: 02: 23 - xetereya kansera kanserê.
• 00: 02: 34 - kansera lûksanê di kişandina xeteran de.
• 00: 02: 48 - Riskkirina kansera pêsîrê.
• 00: 03: 13 - Hypothetical: Heke ku hûn berê kanser heye? (interventional)
• 00: 03: 35 - mekanîzmayên mûzîzalîzmê daneyên danûstendinê yên kanser û mirinê.
• 00: 04: 38 - Sulforaphane û kanserê.
• 00: 05: 32 - belgeyên heywanan nîşan bide bandorkirina broccoli nîşan dide ku li ser rîskên tîrêjê di çilê de.
• 00: 06: 06 - Bandorkirina dermankirinê ya sulforaphane di nexweşxaneyên prostatê de.
• 00: 07: 09 - Biofilîzasyonê ya metotolyona di tissueya rastîn de.
• 00: 08: 32 - Pêşangeha kanserên stenbolê stem cells.
• 00: 08: 53 - Dersa Dîroka: Brassicas wekî xaniyên tendurustî jî di Romayê kevnar de ava kirin.
• 00: 09: 16 - Hêza karûbarên Sulforaphane ku zêdebûna carcinogen (benzene, acrolein).
• 00: 09: 51 - NRF2 wekî bersivên genetîkî bi bersivên antioxidant re.
• 00: 10: 10 - Çawa çalakiya NRF2 bi rêya glutathione-S-conjugates karcinogen çêtir dibe.
• 00: 10: 34 - Brussels sprouts increase in glutathione-S-transfers and damage damage DNA.
• 00: 11: 20 - Broccoli sprout drinks by benzene excretion by 61%.
• 00: 13: 31 - Brokoli a homogenate sproout enzymes in antioxidant increases in airway.
• 00: 15: 45 - Dermankirina mirinê û nexweşîya germbûna dilxwarinê.
• 00: 16: 55 - Powokê sproutê xwarina lîpîdanên xwînê û tevahiya rîska nexweşî di xNUMX diabetics de çêtir dike.
• 00: 19: 04 - Destpêkkirina beşa temenê.
• 00: 19: 21-Sulforaphane-xwarin-enriched-ê xwarinê ji 15% 30% (di hin hinek mercan de).
• 00: 20: 34 - Ji bo zêdebûna danseriya nizanîna dirêjbûna dirêj.
• 00: 22: 05 - sebrazên zêrîn û paqijkirina broccoli xuya dike ku celebek ziravên mezin ên di nav mirovan de kêm dibe.
• 00: 23: 40 - Daxistina Mid-vîdyoyê: kanserê, beşên temenê
• 00: 24: 14 - Xwendekarên Mouse-ê pêşniyar dike ku sulforaphane dibe ku karibe parastinê ya di temenê temenê de çêtirîn.
• 00: 25: 18 - Sulforaphane pêşveçûna porê çêtirîn di modela mîkrobê de balê. Wêne li 00: 26: 10.
• 00: 26: 30 - Destpêkkirina mêjû û tevgerên sektorê.
• 00: 27: 18 - Bandora tesîrê ya broccoli derkeve ser autism.
• 00: 27: 48 - Bandora glucoraphanîn li schizophrenia.
• 00: 28: 17 - Destpêkiya dîskêşiyê (mekanîzmayên mektezîzmê û xwendevanan).
• 00: 31: 21 - Xwendina Mûxoyê bi karanîna xnumxên cuda cuda cuda yên tundûtûjî-stêrdekirin nîşan dide ku sulforaphane bi awayekî fluxoxetine (prozac).
• 00: 32: 00 - Lêkolînek rasterast ya glucoraphanîn lêkolînek di heman demê de di heman demê de di heman demê de deverek bi bandorkirina astengiya ji modela stratejiya sosyal ve.
• 00: 33: 01 - Destpêkirina beşa neurodegenerasyon.
• 00: 33: 30 - Nexweşiya Sulforaphane û Alzheimer.
• 00: 33: 44 - Nexweşiya Sulforaphane û Parkinson.
• 00: 33: 51 - Sulforaphane û nexweşiya Hungtington.
• 00: 34: 13 - Sulforaphane zêdebûna proteînên germê.
• 00: 34: 43 - Destpêkkirina bendava mizgeftê trawmatîk.
• 00: 35: 01 - Sulforaphane lezgîn piştî ku TBI ji bo bîranîn (xwendina mûsa) çêtir dike.
• 00: 35: 55 - Sulforaphane û plastîkaya neuronal.
• 00: 36: 32 - Sulforaphane hînbûna modela şertê duyemîn diabetesê de çêtir dike.
• 00: 37: 19 - Sulforaphane û duchenne dystrophy.
• 00: 37: 44 - Myostatin li pêşangehên hucreyên satelê (li vitro).
• 00: 38: 06 - Daxistina nerazîbûnê û kanserê, zirarê DNA, zexta oksîtatiyê û tehlîzanê, benzene xemgîniyê, nexweşiya cardiovascular, cureyê diyabetê, bandorê li ser mêjî (bandor, xweserîzmê, schizophrenia, neurodegeneration), riya NRF2.
• 00: 40: 27 - Fikir li ser doktorên broccoli an sulforaphane.
• 00: 41: 01 - Li ser malbata dorpêçkirin.
• 00: 43: 14 - Li ser karkirina xwarinê û çalakiya sulforaphane.
• 00: 43: 45 - Bacteriya guhertinê ya sulforaphane ji glucoraphanin.
• 00: 44: 24 - karê karên çêtir çêtir dibe gava ku bi tevgera myrosinase ve ji aliyên veberhênanê re hev.
• 00: 44: 56 - teknolojiyên xwarinê û sebên zêrîn ên xerîb.
• 00: 46: 06 - Asotiocyanates wek goitrogens.

li hev kirin

Sciencedirect.com/science/article/pii/S2213231716302750

Sulforaphane hilberîn e?

Heating Têkiliya Prithîniya Epîtiospecifier û Barkirina Sulforaphane di Brokoli

Abstract

Sulforaphane, îsotîocyanateyek ji brokolî ye, yek ji wan antîkarsinojenên herî bi hêz e ku ji xwarinê tê derxistin. Ev pêkhate di sebzeya saxlem de nîn e, belkî ew ji pêşerokê wê yê glucosinolate, glucoraphanin, bi çalakiya myrosinase, enzîmek thioglucosidase, çê dibe, dema ku tevna brokolî tê pelçiqandin an dixwar. Lêbelê, hejmarek lêkolînan destnîşan kirin ku hilberîna sulforaphane ji glucoraphanin kêm e, û ku analogek nitrile ya ne-bioaktîf, sulforaphane nitrile, dema ku tevna nebatê li germahiya odeyê tê perçiqandin, hilbera hîdrolîzê ya bingehîn e. Delîlên dawî destnîşan dikin ku di Arabidopsis de, avakirina nîtrilê ji glucosinolates ji hêla proteînek hestiyar-germ, proteîna epithiospecifier (ESP), kofaktorek ne-katalîtîk a myrosinase ve tê kontrol kirin. Armancên me ew bûn ku em bandorên germkirina kulîlk û gulên brokolî li ser damezrandina sulforaphane û sulforaphane nitrile lêkolîn bikin, da ku diyar bikin ka brokolî çalakiya ESP-ê dihewîne, dûv re bi guheztinên girêdayî germê yên di çalakiya ESP, naveroka sulforaphane û biyoaktîvîteyê de, wekî ku ji hêla inductionê ve hatî pîvandin ve girêdayî ye. qonaxa II detoxification enzîma quinone reductase (QR) di çanda hucreyê de. Germkirina kulîlkên brokolî yên teze an şînikên brokolî di germahiya 60 ℃ de berî homojenkirinê bi hevdemî avakirina sulforaphane zêde kir û pêkhatina sulforaphane nitrile kêm kir. Wendabûnek girîng a çalakiya ESP bi kêmbûna pêkhatina sulforaphane nitrile re paralel bû. Germkirina di 70 �C û jortir de çêbûna her du hilberan di kulîlkên brokolî de kêm kir, lê ne di kulîlkên brokolî de. Induction QR di şaneyên Hepa lclc7 yên hepatoma mişkê ya çandî de di avakirina sulforaphane de zêde dibe.

Berê germkirina kulîlk û جوانên brokolî heya 60 C piştî pelçiqandinê bi girîngî avabûna tevnî ya sulforaphane (SF) ya myrosinase-katalîzekirî zêde kir. Ev bi kêmbûna çêbûna sulforaphane nitrile (SF Nitrile) û çalakiya proteîna epithiospecifier (ESP) re têkildar bû.

Keywords: Broccoli, Brassica oleracea, Cruciferae, Cancer, Anticarcinogen, Sulforaphane, Sulforaphane nîtrile, proteîtiya Epithiospecifier, Quinone reductase

Di encamê de, sulforaphane fîtokîmyayî ye ku di brokolî, û sebzeyên din ên xaçparêz de tê dîtin. Rêjeyek oksîdantên nekontrolkirî ku ji hêla faktorên hundurîn û derveyî ve têne çêkirin dikare di laşê mirov de bibe sedema stresa oksîdative ku di dawiyê de dibe sedema cûrbecûr pirsgirêkên tenduristiyê. Sulforaphane dikare hilberîna Nrf2 çalak bike, faktorek transkrîpsiyonê ya ku arîkariya birêkûpêkkirina mekanîzmayên antîoksîdan ên parastinê dike ku bersiva hucreyê li hember oksîdantan kontrol dike. Qada agahdariya me bi pirsgirêkên tenduristiya chiropractîk û spinal ve sînorkirî ye. Ji bo nîqaşkirina mijarê, ji kerema xwe ji Dr. Jimenez bipirsin an bi me re têkilî daynin915-850-0900.

Dr. Alex Jimenez

Referenced from: Sciencedirect.com

Nîqaşa Mijara Zêde:. Paina Paşê ya Akut

Êşa piştê. Ew li seranserê cîhanê li seranserê cîhanê sedemên seqetî û rojên bêriya xebatê ye. Painşa piştê sedema duyemîn a herî hevpar a serdanên ofîsa doktor dide, tenê ji hêla enfeksiyonên nefesê yên jorîn zêdetir e. Nêzîkî ji sedî 80yê nifûsê di jiyana xwe de herî kêm carekê êşa piştê dikişîne. Spine avahiyek tevlihev e ku ji hestî, lebat, lebat û masûlke, di nav lebatên nerm ên din de pêk tê. Ji ber vê yekê, birîndarbûn û / an mercên giran, wek dîsên herniated, dibe ku dibe ku nîşanên nîşan bide paşê paşê. Girtîgehên werzişî yan birîndarên otobloyê gelek caran ji sedemên paşê paşê paşê têne têne, lê carinan, carinan hêsantirên tevgeran dikarin encamên xweş bibin. Bi dilsoz, alternatîfên alternatîf ên alternatîf, wekî lênêrîna chiropractîk, dikare dikare bi alîkariya karanîna spînal û pisîkên pisîkê, dibe ku bi xilasiya xirabtir dibe baştir bike.

EXTRA EXTRA | BİXWÎNE BİXWÎNE: Pêşwazî El Paso, TX Chiropractor

***